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在生殖生物学与卵巢功能研究的广阔领域中，拥有一个稳定、可靠的体外模型至关重要。KK-1小鼠颗粒细胞系，正是这样一把开启生命奥秘之门的“金钥匙”。作为国内领先的生物技术服务商，北京百欧博伟生物技术有限公司将为您全面解析这一珍贵的细胞工具，助您的科研之路更加顺畅。

一、KK-1细胞系概述：来源与特性

KK-1细胞系起源于SV40 Large T抗原转基因小鼠的卵巢颗粒细胞。这些细胞并非来自正常的卵巢，而是由转基因诱导产生的肿瘤细胞，因此具有永生化特性，能够在体外无限增殖，为科学研究提供了稳定且充足的细胞来源。

核心特性：

• 细胞类型： 小鼠卵巢颗粒细胞样肿瘤细胞。

• 形态特征： 通常呈现为上皮样或成纤维样细胞，贴壁生长。

• 生物标志物： 保留了许多颗粒细胞的特征，如可表达促卵泡生成素受体、细胞色素P450芳香化酶等，对促性腺激素如FSH有一定反应性。

• 核心价值： 能够模拟体内颗粒细胞的多种功能，是研究卵泡发育、类固醇激素合成、排卵机制以及卵巢相关疾病（如多囊卵巢综合征、卵巢癌）的经典体外模型。

二、KK-1细胞系的培养方法

一套标准、规范的培养流程是确保实验可重复性和数据准确性的基石。

1. 所需试剂与设备

• 基础培养基： DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）或 RPMI-1640。

• 血清： 10% 胎牛血清。为确保细胞状态稳定，建议使用优质、无菌、无支原体的FBS。

• 添加剂： 1% 青霉素-链霉素双抗溶液，用于防止细菌污染。

• 消化试剂： 0.25% 胰蛋白酶-EDTA 溶液。

• 培养条件： 37°C，5% CO? 的恒温恒湿培养箱。

• 耗材： T25/T75细胞培养瓶、离心管、移液器等。

2. 复苏、传代与冻存流程

• 细胞复苏：

  1. 从液氮罐中迅速取出冻存管，立即置于37°C水浴中，轻轻摇晃至其完全融化（约1-2分钟）。

  2. 在超净工作台中，将细胞悬液转移至含5mL完全培养基的离心管中，轻柔混匀。

  3. 1000 rpm离心5分钟，弃去上清液。

  4. 用新鲜完全培养基重悬细胞，接种至培养瓶，轻轻摇匀。

  5. 放入培养箱，24小时后观察细胞贴壁情况并更换新鲜培养基。

• 细胞传代：

  1. 当细胞融合度达到80%-90%时，即可进行传代。

  2. 弃去旧培养基，用PBS轻柔润洗细胞1-2次。

  3. 加入适量0.25%胰蛋白酶，覆盖瓶底即可，置于培养箱中消化1-3分钟。

  4. 在显微镜下观察，当细胞变圆、间隙增大时，立即加入2倍以上体积的完全培养基终止消化。

  5. 用移液器轻轻吹打瓶底，使细胞完全脱落，形成单细胞悬液。

  6. 收集悬液，离心，弃上清，用新鲜培养基重悬，按 1:3 至 1:6 的比例分瓶传代。

• 细胞冻存：

  1. 选择处于对数生长期、状态良好的细胞。

  2. 按传代方法消化并收集细胞，离心。

  3. 用预冷的细胞冻存液（配方：90% FBS + 10% DMSO，或使用商业无血清冻存液）重悬细胞，密度约为5×10? 至 1×10? cells/mL。

  4. 分装至冻存管，采用程序性降温（或使用细胞冻存盒）后，转移至液氮中长期保存。

三、培养注意事项

成功的细胞培养在于对细节的把握。以下是KK-1细胞培养中的关键点：

1. 定期观察： 每日在显微镜下观察细胞形态、密度和培养基颜色。健康的KK-1细胞贴壁牢固，形态均一。若发现大量漂浮细胞或形态异常，需及时处理。

2. 适时传代： 切忌过度生长（超过95%融合）。过度拥挤会导致细胞接触抑制，甚至发生分化或凋亡，影响后续实验。

3. 轻柔操作： 颗粒细胞相对娇嫩。在吹打和消化时动作要轻柔，避免过度机械力损伤细胞。

4. 消化时间控制： 胰蛋白酶消化时间至关重要。时间过短细胞无法脱落，时间过长则会损伤细胞。需通过显微镜密切监控。

5. 无菌原则： 所有操作必须在超净工作台中进行，严格遵循无菌操作规程，定期对培养箱进行消毒，防止微生物污染。

6. 血清批次： 不同批次的FBS对细胞生长状态可能有影响。在更换血清批次时，建议先进行小规模测试。

四、KK-1细胞系的应用领域

凭借其独特的生物学特性，KK-1细胞系在多个前沿研究领域发挥着不可替代的作用：

• 卵巢生理与卵泡发育研究： 用于探究FSH、LH等激素对颗粒细胞增殖、分化的调控机制，以及卵泡刺激素受体的信号转导通路。

• 类固醇激素合成研究： 研究颗粒细胞在雌激素、孕激素合成过程中的关键作用，特别是芳香化酶的表达与调控。

• 生殖毒理学： 作为体外模型，评估环境污染物、化学药物、重金属等外源性物质对卵巢功能的潜在毒性影响。

• 女性生殖疾病建模：

  • 多囊卵巢综合征： 研究胰岛素抵抗、雄激素过多等对颗粒细胞功能的影响。

  • 卵巢早衰： 探索细胞凋亡、自噬等在卵巢功能衰退中的作用。

  • 卵巢癌： 作为颗粒细胞瘤的模型，用于抗癌药物筛选及发病机制研究。

• 药物筛选与开发： 用于筛选和评估治疗不孕症、调节卵巢功能或抗卵巢癌的新药。

五、北京百欧博伟生物技术有限公司的服务支持

我们不仅提供高质量、背景清晰的KK-1小鼠颗粒细胞系，还提供全方位的技术支持与服务：

• 优质细胞资源： 确保细胞来源清晰、无支原体污染、活力充沛。

• 专业技术指导： 提供详尽的培养Protocol及疑难解答。

• 配套试剂： 提供与KK-1细胞培养相匹配的优质培养基、血清、消化试剂等。